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GA平台介绍

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Solexa技术最早由两位剑桥大学的化学家创立,利用专利核心技术“DNA 簇”和“可逆性末端终结”,达成自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。2007年,Illumina公司花费6亿美金的巨资收购了 Solexa,利用其专利核心技术,实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。

Illumina Genome Analyzer作为新一代测序技术平台,具有高准确性,高通量,高灵敏度,和低运行成本等突出优势,广泛应用于传统基因组学(测序和注释)以及功能基因组学(基因表达及调控,基因功能,蛋白/核酸相互作用)研究。

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Genome Analyzer IIx测序技术原理

1)文库制备

将基因组DNA打成几百个碱基(或更短)的小片段,并在两个末端加上接头(adapter)。

2) 桥式PCR产生DNA簇

a、Solexa 测序专用的测序芯片(flow cell)表面连接有一层单链引物(Primer),单链状态的 DNA片断与芯片表面的引物通过碱基互补被一端固定在芯片上;

b、通过扩增反应使得单链 DNA成为双链 DNA;

c、双链再次变性后成为单链,其一端固定在测序芯片上,另外一端(5’或 3’)随机和附近的另外一个引物互补,被固定住,形成“桥“(bridge);

d、在测序芯片上同时有上千万 DNA 单分子发生以上的反应;

e、c 中形成的单链桥,以周围的引物为扩增引物,在测序芯片表面再次进行扩增,形成双链;

f、双链经变性成单链,再次形成桥,成为下一轮扩增的模板继续扩增反应;

g、在反复进行 30 多轮扩增,每个单分子得到了 1000 倍扩增,成为单克隆“DNA簇群”;

h、“DNA簇群”在Genome Analyzer IIx测序仪上进行序列分析;

3)测序反应

Illumina Genome AnalyzerIIx是一种基于单分子簇的边合成边测序技术,基于专有的可逆终止化学反应原理。测序时加入带有4种荧光标记的dNTP,每个碱基末端被 保护基团封闭,每个循环只允许单个碱基合成,经过扫描,读取该次反应后的荧光信号结果,该保护基团被除去,下一个反应可继续进行,如此反复,得出碱基的精 确序列。[/vc_column_text][vc_column_text el_class=”pagesci”]

Illumina测序平台的特点

1)可控制的高通量

Genome Analyzer IIx系统一次实验可读取量大于15 亿个碱基/芯片。

2)上样需求低

Genome Analyzer系统需要DNA样品的上样量只在pmol级(ng级),并且能应用在很多样品有限的实验(比如ChIP-seq、Trscriptome- Sequencing,microRNA-seq)中。

3)简单、快速、自动化

这个优势体现在:最小的实验室也能像大型基因组中心一样进行大规模的实验。制备样品文库可以在几小时内完成,一个星期内就能得到高精确度的数据。由独立软 件控制的自动生成DNA簇的过程可以在5小时之内(30分钟手工操作)完成。这个自动化的流程不需要进行Emulsion PCR,减少了手工操作误差和污染可能性,也不需要机器人操作或洁净室。快速的实验流程使Genome Analyzer的能力增至最大,而自动化步移降低了项目的时间和费用。

4)低错误测序比例

利用新颖的可逆荧光标记终止子, 可以在DNA链延伸的过程中检测单个碱基掺入。 由于四个可逆终止子dNTP在每个测序循环都存在,自然的竞争减少了掺入的错配。[/vc_column_text][/vc_column][/vc_row]

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关于生命之美

武汉生命之美科技有限公司成立于2010年7月,是一家专注于将高通量测序技术(NGS)转化为科学发现和产业应用的生物高科技企业。生命之美使用新一代测序技术和RNA-蛋白质互作的科学技术优势,短短数年时间,就成长为一个拥有强大实验室和科研实力的合作平台。生命之美不但已经与各高校、研究所的实验室一起合作science,也启动了与普通大众一起science的模式,希望以健康产品服务每一名个体。生命之美为爱和梦想而来,它期待着与中国、一带一路各国乃至全球的伙伴们一起做一个前所未有的科学梦:用科学祝福全球!

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公司动态
  • 热烈祝贺生命之美CEO张翼博士荣获省级荣誉
    2020年10月26日
  • 生命之美与华农赵凌课题组合作文章发表于Genome Biology
    2020年9月17日
  • 生命之美与上交大团队合作文章发表于PLoS Pathogens
    2020年9月17日
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