单细胞测序(scRNA-seq)

技术简介

1. 技术简介

单细胞技术是指在单个细胞水平上，对基因组、转录组、表观组和蛋白组等进行文库构建和高通量测序分析的新技术，它能够揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态，反映细胞间的异质性，2013年被Nature Method评选为年度技术。单细胞技术可同时平行分析成千上万个单细胞内数千个基因的表达变化，正在改变我们对细胞类型和功能的理解，将进一步助力在免疫学、神经生物学、胚胎发育和肿瘤及微环境等多个领域内生物学过程的探索和研究。

2015年以来，随着BD Rhapsody™、10X Genomics、Drop-seq、Micro-well、Split-seq等单细胞测序技术的飞速发展，单细胞测序的成本大幅度降低，大规模样本的单细胞测序已成为可能。

2. 技术方法：

单细胞转录组测序：

是在单细胞水平对转录组进行扩增与测序的一项新技术。其原理是将分离的单个细胞的微量转录组RNA进行扩增后进行高通量测序。

单细胞ATAC测序：

染色质分为常染色质和异染色质，而常染色质处于松散的开放状态，允许反式作用结合顺式调控元件，进而调控基因表达。ATAC-seq利用tn5酶切割并捕获染色质开放区域，结合高通量测序和生信分析，可以系统研究全基因组范围内染色质开放区域，是表观调控的新方向。

单细胞免疫组库测序：

以T/B淋巴细胞为研究目标，通过多重PCR或5’RACE技术特异性扩增决定B淋巴细胞受体(BCR)或T淋巴细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR3区)，再结合高通量测序技术，全面评估免疫系统的多样性，深入挖掘免疫组库与疾病的关系。通过单细胞测序平台进行免疫组库研究，可同时实现单细胞转录组和单细胞V(D)J测序，为免疫组学研究提供更具扩展性的平台。